10×CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液
|
產(chǎn)品編號
|
產(chǎn)品名稱
|
規(guī)格
|
|
CP5015
|
10×CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液
|
500 ml
|
● 簡介：
10×CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液（10×CAPS Transfer Buffer）適用于蛋白電泳后凝膠上蛋白的轉(zhuǎn)膜，主要成分為CAPS[3-（環(huán)己氨基）-1-丙磺酸]。本轉(zhuǎn)膜液配制便捷，稀釋后無需調(diào)節(jié)pH值，pH約為11.0。由于緩沖液具有較高的pH，特別適合于堿性蛋白非變性電泳后的轉(zhuǎn)膜實(shí)驗(yàn)。另外，由于緩沖液中不含有甘氨酸，轉(zhuǎn)膜后的蛋白可以進(jìn)行N端測序。
該緩沖液最終可配成至少5升即用型1×緩沖液（根據(jù)需求補(bǔ)加甲醇）。
● 保存和運(yùn)輸：
4℃保存，常溫運(yùn)輸，一年有效；配成1×含甲醇溶液后4℃貯存，1個月有效。
● 配制方法：
將10×轉(zhuǎn)膜緩沖液稀釋10倍，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求加或不加甲醇，即配成1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液。
|
|
1×即用型轉(zhuǎn)膜緩沖液
|
|
|
500 ml
|
1 L
|
2 L
|
|
10×轉(zhuǎn)膜緩沖液
|
50 ml
|
100 ml
|
200 ml
|
|
超純水
|
350 ml
|
700 ml
|
1400 ml
|
|
無水甲醇
|
50 ml
|
100 ml
|
200 ml
|
|
|
不用調(diào)節(jié)pH
|
注：非變性蛋白電泳轉(zhuǎn)膜不加或少加甲醇；變性蛋白電泳轉(zhuǎn)膜可以加終濃度低于10%甲醇。
● 使用方法：
1. 轉(zhuǎn)膜方法：使用CAPS轉(zhuǎn)膜緩沖液，電泳后的轉(zhuǎn)膜建議用濕轉(zhuǎn)法。
2. 膜的選擇：轉(zhuǎn)膜可以使用PVDF膜和NC膜。根據(jù)蛋白大小選擇膜的孔徑。一般說來，大于20 kD蛋白選擇0.45 μm孔徑，低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。
3. 三明治結(jié)構(gòu)：轉(zhuǎn)膜三明治結(jié)構(gòu)與傳統(tǒng)轉(zhuǎn)膜相同，即根據(jù)“黑膠白膜”制作三明治，即膜置于轉(zhuǎn)膜夾芯正極一側(cè)，凝膠置于轉(zhuǎn)膜夾芯負(fù)極一側(cè)，這樣凝膠上帶負(fù)電荷的蛋白才能轉(zhuǎn)移到膜上。
蛋白轉(zhuǎn)膜三明治制作：
負(fù)極（電轉(zhuǎn)夾黑色面）-海綿墊-1層1 mm厚度濾紙-凝膠-膜-1層1 mm厚度濾紙-海綿墊-正極（電轉(zhuǎn)夾白色面）
4. 轉(zhuǎn)膜條件：
以下轉(zhuǎn)膜條件僅供參考，客戶針對自己的目的蛋白大小，最好經(jīng)過1-2次預(yù)實(shí)驗(yàn)后，確定最佳的轉(zhuǎn)膜條件。
|
蛋白大小
|
穩(wěn)流
|
建議時間
|
降溫措施
|
|
低于70kD
|
150 mA
|
1 小時
|
不需要
|
|
70-300 kD
|
200 mA
|
1.5-2 小時
|
需要
|
|
高于300 kD
|
200 mA
|
2.5-3.5 小時
|
需要
|
5. 進(jìn)行后續(xù)WB操作：封閉-一抗-二抗-檢測。